它们主要以鼠类为食，也会吃一些昆虫、小鸟、蜥蜴和鱼等动物。关于它们的进食，它们都有吐"食丸"的习性，其素囔具有消化能力，食物常常整吞下去，并将食物中不能消化的骨骼、羽毛、毛发、几丁质等残物渣滓集成块状，形成小团经过食道和口腔吐出，叫食丸，也叫唾余。
猫头鹰有时候会吃同类的。猫头鹰吃蝙蝠、雀类、金龟子、莺类、蝗虫、蝼蛄、甲虫、黑线仓鼠、黑线姬鼠、大仓鼠、棕色田鼠，以及小型蜥蜴、鱼等动物。猫头鹰的主要食物是鼠类，对于捕捉鼠类来说，前期的隐蔽远远比速度更为重要，所以，猫头鹰进化出了具有微纳结构的羽毛。这种羽毛的功能就像消声器一样，确保了猫头鹰飞行悄然无声。